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昆明地区RH阴性者RHD假基因(RHDψ)和杂交RHD-CE-D基因的检测和医学应用

发布时间:2019-07-12 10:03
【摘要】: 目的:用PCR基因分型技术分析研究昆明地区常住人口Rh阴性血型的D基因多态性,研究和探讨这些等位基因的分子基础及其Rh阴性血型的D基因在中国人中的群体频率,发现更多的D变异基因;建立和完善本地区Rh血型的PCRRHD基因检测方法,为产前诊断和临床输血提供RHD基因检测信息。 方法:选择昆明地区的健康人群为研究对象,首先用血清学方法筛选出46例Rh阴性血型样本,再通过吸收放散试验从这46例Rh阴性血型样本中检测出Del表型个体。用经典的苯酚-氯仿-异戊醇方法从样本中提取基因组DNA作为PCR反应的模板,通过PCR-SSP技术检测D基因多态性,首先采用外显子—序列特异性引物扩增和检测所有样本的D基因外显子组成情况,检测结果为D基因部分存在者再采用内含子—序列特异性引物进行PCR扩增,聚丙烯酰胺凝胶电泳,硝酸银染色显带分析结果,最后通过DNA测序技术检测RHD假基因(RHDψ)和杂交RHD-CE-D基因。 结果:本研究在46例Rh阴性血型样本中,D基因完整缺失者29例(63%),为真正Rh阴性;D基因完整存在者12例(26.1%),存在全部外显子,即Del表型;D基因部分存在者5例(10.9%),其中2例仅存在D基因的第10外显子,1例存在D基因的第7、9、10外显子,1例存在D基因的第4、6外显子,1例仅存在D基因的第6外显子。DNA测序结果显示,2例仅存在D基因的第10外显子的样本均为RHD-CE(3-9)-D杂合基因,1例存在D基因的第4、6外显子为RHD-CE(2-3,5,7-9)-D杂合基因,是新发现的变异等位基因。本实验在所研究的46例Rh阴性血型样本中未检测到RHD假基因(RHDψ)。 结论: 1.昆明地区常住人群存在高频率的Del表型和RHD-CE(3-9)-D杂合基因。 2.在昆明人群发现一种新型D变异等位基因即RHD-CE(2-3,5,7-9)-D杂合基因。
文内图片:真实Rh阴性(D基因外显子全部缺失,内参照正确)
图片说明: 图2.真实Rh阴性(D基因外显子全部缺失,内参照正确)(2)Del表型本实验检测到Del表型12例,占全部样本26.1%,与吸收放散试验结果一致。在抗人球蛋白试验中,这12例样本全部是Rh阴性,但PCR检测其D基因,7个外显子全部存在。(见图3一图6)多伙bP147bP
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图片说明: 图2.真实Rh阴性(D基因外显子全部缺失,内参照正确)Del表型本实验检测到Del表型12例,占全部样本26.1%,与吸收放散试验结果一致。在抗人球蛋白试验中,这12例样本全部是Rh阴性,但PCR检测其D基因,7个外显子全部存在。(见图3一图6)
【学位授予单位】:昆明医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:D919

【参考文献】

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本文编号:2513631


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