热门搜索: 论文 发表 社科期刊 北大核心 南大核心 cssci 科技期刊 教育

当前位置:主页 > 医学论文 > 病理论文 >

人血管内皮生长因子受体-3胞外1-3区基因的表达

发布时间:2019-05-23 16:31
【摘要】:目的 1.血管内皮生长因子受体-3基因的原核表达载体构建 2.血管内皮生长因子受体-3基因的原核融合表达 方法 以本实验室构建的克隆质粒为模板,设计合适引物,在上游引物中加入酶切位点和起始密码,在下游引物中加入终止密码和酶切位点,,把上述VEGFR3扩增产物经切胶回收纯化后与pBV220质粒经双酶切纯化后的产物连接,把该质粒命名为pBV220-VEGFR3,转化大肠杆菌DH5α,筛选出阳性菌株,温控诱导表达,超声破菌,对包涵体进行洗涤纯化。以pBV220-VEGFR3为模板通过PCR方法构建C端含有HisTag的pBV220-VEGFR3his质粒并转化大肠杆菌DH5α,用Western-blotting鉴定,用Ni~(2+)-NTA树脂柱对表达产物进行纯化。 结果 构建了pBV220-VEGFR3质粒表达载体,SDS-PAGE电泳表明在大肠杆菌DH5α中成功表达出VEGFR3因子,同时构建了pBV220-VEGFR3融合表达载体,SDS-PAGE电泳和Western-blotting结果表明在大肠杆菌DH5α中成功表达出VEGFR3融合蛋白,用Ni~(2+)-NTA树脂柱纯化后获得VEGFR3融合蛋白纯品。 结论 应用基因工程技术,成功构建了pBV220-VEGFR3质粒表达载体,表达纯化出蛋白,为进一步的研究奠定了基础。
[Abstract]:Objective 1. Construction of prokaryotic expression vector of vascular endothelial growth factor receptor-3 gene. The prokaryotic fusion expression method was based on the cloned plasmid constructed in our laboratory as template. Appropriate primers were designed, enzyme digestion sites and initial codes were added to upstream primers, termination codes and enzyme digestion sites were added to downstream primers, and the VEGFR3 amplification products were recovered and purified by gel cutting and linked to the products purified by double enzyme digestion of pBV220 plasmid. The plasmid was named pBV220-VEGFR3, and transformed into E. coli DH5 伪. The positive strain was screened out, the expression was induced by temperature control, the inclusion body was washed and purified by ultrasonic broken bacteria. Using pBV220-VEGFR3 as template, the pBV220-VEGFR3his plasmid containing HisTag at C terminal was constructed by PCR and transformed into E. coli DH5 伪. The expressed product was identified by Western-blotting and purified by Ni~ (2)-NTA resin column. Results pBV220-VEGFR3 plasmid expression vector was constructed. SDS-PAGE electrophoresis showed that VEGFR3 factor was successfully expressed in E. coli DH5 伪, and pBV220-VEGFR3 fusion expression vector was constructed at the same time. The results of SDS-PAGE electrophoresis and Western-blotting showed that the VEGFR3 fusion protein was successfully expressed in E. coli DH5 伪. The pure VEGFR3 fusion protein was purified by Ni~ (2)-NTA resin column. Conclusion pBV220-VEGFR3 plasmid expression vector was successfully constructed by genetic engineering technique, and the protein was expressed and purified, which laid a foundation for further research.
【学位授予单位】:山西医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:R346

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 马强;耿焱;黄茂梁;吴英松;李明;;梅毒螺旋体0751基因的克隆、表达及鉴定[J];热带医学杂志;2011年06期

2 胡艳秋;;人RGS22蛋白表达及多克隆抗体制备[J];细胞与分子免疫学杂志;2011年09期

3 孙佳;黄欣;朱玲玲;吴奎武;范明;;急性低氧对小鼠黏附分子CHL1组织水平表达的影响[J];中国应用生理学杂志;2011年03期

4 窦洪涛;张清华;朱旭东;党颖;徐龙;李涛;王林萍;董晓文;;37LRP基因表达载体构建及蛋白表达的研究[J];中国妇产科临床杂志;2011年04期

5 廖明;莫财锋;周怡;何敏;卓朗;;鸡尾酒疗法对大鼠肝星状细胞的纤维化相关基因表达和蛋白谱的影响[J];世界华人消化杂志;2011年17期

6 王惠榕;高岚美;萧剑雄;严延生;张春阳;;肺炎支原体ORF6区蛋白重组抗原制备及在血清学诊断中的初步应用[J];中国人兽共患病学报;2011年07期

7 刘秋均;李洪;杨烨;张春燕;;小鼠H22肝癌细胞中高表达膜蛋白的初步分析(英文)[J];泸州医学院学报;2011年05期

8 洪文艳;王浩然;王津;郭兆彪;周蕾;杨瑞馥;;鼠疫菌PsaA抗原的表达及抗体制备和应用[J];现代生物医学进展;2011年12期

9 阮建波;康东平;;乳腺癌手术标本BRCA-1蛋白表达与HER-2基因扩增的临床意义[J];求医问药(下半月);2011年03期

10 刘世敏;夏勇;李艺;何金森;施征;吴焕淦;崔学军;;Effects of Electroacupuncture on bcl-2 and bcl-XL in the Degenerative Cervical Intervertebral Disc of Rats[J];Journal of Acupuncture and Tuina Science;2009年06期

相关会议论文 前10条

1 王光春;郑军华;段强林;许云飞;鄢阳;高其若;;CO_2气腹对肾细胞癌中肿瘤转移相关基因和蛋白表达的影响及其机制[A];第十六届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2009年

2 宁博;;CyclinG1、G2蛋白表达与喉癌的相关性研究[A];2010全国耳鼻咽喉头颈外科中青年学术会议论文汇编[C];2010年

3 曹梦;于艳雪;刘玉方;刘华贵;赵兴波;;双向电泳和MALDI-TOF分析三个鸡品种肌肉组织蛋白表达[A];第十二次全国畜禽遗传标记研讨会论文集[C];2010年

4 黄慧妙;章斌;;125Ⅰ标记反义肽核酸抑制SKOV3细胞CerbB-2mRNA和Her-2蛋白表达的初步实验[A];第四届长三角妇产科学术论坛暨浙江省2009年妇产科学术年会论文汇编[C];2009年

5 阳敏燕;;RAE、VPA对LPS海马C-fos蛋白表达的影响及意义[A];中华医学会第十三次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2010年

6 张鲁伟;周荣祥;綦海燕;孙小庆;白鑫;韩保健;杨荣辰;王鹏;;膀胱移行细胞癌中△Np63和MDM2蛋白表达及其意义[A];第七次中国中西医结合泌尿外科学术年会暨第二次广东省中西医结合泌尿外科学术年会论文集[C];2009年

7 刘心;余景星;;多西他赛诱导HL60/ADR细胞凋亡及对P-gp、Bcl-2、Bax蛋白表达的影响[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年

8 裘云庆;徐丽倩;马英玉;李继承;陈海啸;林爱芬;;sFRP1基因遗传不稳定性可作为中国人肝癌预后的指标[A];第十八次全国中西医结合肝病学术会议论文汇编[C];2009年

9 刘杰;;HMGB1通过抑制Kv4基因转录和蛋白表达下调心肌瞬间外向钾电流[A];中国病理生理学会第九届全国代表大会及学术会议论文摘要[C];2010年

10 王慧;孟庆志;段谅;陈云;谭家武;程明亮;张权;;香囊对小鼠呼吸道TLR2、TLR4基因及蛋白表达的影响[A];中华医学会呼吸病学年会——2011(第十二次全国呼吸病学学术会议)论文汇编[C];2011年

相关重要报纸文章 前10条

1 记者谢卫群;中国完成SARS病毒主要基因克隆和蛋白表达[N];人民日报海外版;2003年

2 张中桥;黄芪对脑缺血再灌注损伤有神经保护作用[N];中国医药报;2006年

3 张中桥;黄芪对脑缺血再灌注损伤有神经保护作用[N];中国中医药报;2006年

4 衣晓峰;三种妇科肿瘤 同一基因异常[N];健康报;2007年

5 稽旭东 杨丽佳;SNCG基因去甲基化是癌症转移标记[N];健康报;2006年

6 张中桥;肺鳞癌与人乳头瘤病毒感染有关[N];中国医药报;2006年

7 记者 刘海英;英开发出肿瘤退化实时监控新方法[N];科技日报;2010年

8 谢明霞;针刺防治偏头痛[N];健康报;2006年

9 慕永平;上海中医药大学发现两古方抑制肝硬化作用机制[N];中国医药报;2006年

10 张中桥;肺鳞癌与人乳头瘤病毒有关[N];健康报;2006年

相关博士学位论文 前10条

1 王育蓉;人系膜细胞中TNFα促进IP_3R1的表达及相关信号传导通路的研究[D];中国医科大学;2010年

2 彭翔;PI3K/Akt信号通路在腹膜间皮细胞转分化中的作用及机制研究[D];中南大学;2010年

3 何津岩;人类p100蛋白对HeLa细胞周期的影响及其机制研究[D];天津医科大学;2008年

4 曲银娥;COXⅦa在中老年男子部分雄激素缺乏综合征中的作用及机理研究[D];河北医科大学;2010年

5 邱瑾;氧糖剥夺对Cdh1蛋白表达的影响及其在星形胶质细胞反应性增殖中的作用研究[D];华中科技大学;2012年

6 任远;BMP4基因突变在颈椎后纵韧带骨化症中促异位成骨机制研究[D];首都医科大学;2012年

7 唐伟;针刺预处理对全脑缺血大鼠脑保护机制的实验研究[D];黑龙江中医药大学;2004年

8 徐霞;鸟氨酸脱羧酶(ODC)及转录因子RUNX3在胃癌中表达失调的分子机制研究[D];山东大学;2012年

9 叶轲;Net1蛋白促进肝癌细胞MHCC-97H侵袭转移的分子机制研究[D];中南大学;2010年

10 李玄英;阿片受体在吗啡耐受机制中的作用研究[D];中国协和医科大学;2008年

相关硕士学位论文 前10条

1 柴红丽;Rho BTB2在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达及临床意义[D];中南大学;2012年

2 贾小英;组织蛋白酶L介导Ox-LDL诱导单层HUVECs通透性增加及其机制探讨[D];南华大学;2012年

3 陈夏;骨关节炎关节软骨细胞Fas基因异常甲基化及蛋白表达的实验研究[D];中南大学;2010年

4 孙丽;pESP15b/pARA-SP6表达载体的构建及应用研究[D];大连理工大学;2005年

5 覃健敏;IGF-1R基因多态性及p16、p21蛋白水平与巴马长寿关系的研究[D];广西医科大学;2011年

6 谢奎;CHO细胞在Tubespin中的培养工艺及其代谢分析[D];暨南大学;2011年

7 李莹莹;乙肝表面抗原S蛋白与纤维蛋白原α链相互作用的验证及功能学研究[D];福建医科大学;2012年

8 丁悦;EGFL7抑制NF-κB核转位减少高氧诱导的内皮细胞凋亡[D];南方医科大学;2012年

9 王燕;PIG11诱导HepG2细胞凋亡及其机制的初步探讨[D];南华大学;2010年

10 潘婷;广西重型β-地中海贫血BCL11A基因多态性与HbF及γ-珠蛋白表达的相关性研究[D];广西医科大学;2012年



本文编号:2484046


论文下载
论文发表
教材专著
专利申请


    下载步骤:
    1.微信扫码,备注编号 2484046.
    2.
    点击下载


    本文链接:http://www.bigengculture.com/yixuelunwen/binglixuelunwen/2484046.html

    ×
    推荐期刊