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重组人B淋巴细胞刺激因子(hsBLyS)对B淋巴细胞的免疫调节作用及其机制研究

发布时间:2019-07-12 10:27
【摘要】:本文通过离体原代培养的小鼠脾脏B淋巴细胞和小鼠为实验对象,运用细胞培养、流式细胞分析、激光共聚焦显微镜分析等免疫学和细胞学技术,综合研究和观察了hsBLys在离体和在体条件下对B淋巴细胞的增殖、存活和分化的活性作用及其胞内Ca~(2+)信号变化,从多个角度探讨了hsBLyS对免疫细胞特别是B淋巴细胞的发育分化乃至整体免疫系统的调控作用及其作用机制。结果如下: 1 hsBLyS对离体脾B淋巴细胞增殖及存活的影响 用带有抗CD19的磁珠分离脾脏的B淋巴细胞,调整细胞浓度至1×10~5个/ml,适应性培养4h后加入hsBLyS或/和anti-IgM的不同浓度的工作液,继续培养一定时间后MTT法检测光吸收值。结果表明:hsBLys单刺激能够诱导B淋巴细胞增殖,且hsBLyS在0.5-2μg/ml浓度范围内随着浓度升高而加强;hsBLyS+anti-IgM共刺激脾脏B细胞虽没有增殖,但进一步在LPS刺激后表现出增殖明显升高,其刺激指数极显著高于对照组:hsBLyS在体外可以延长B淋巴细胞的存活时间。提示:hsBLyS能够诱导体外培养的脾脏B淋巴细胞的存活和增殖,hsBLyS+anti-IgM共同作用能增强B淋巴细胞免疫活性。 2 hsBLyS单体及三聚体对离体脾B淋巴细胞作用比较 用带有抗CD19的磁珠分离脾脏的B淋巴细胞,调整细胞浓度至1×10~5个/ml,适应性培养4h后加入hsBLyS单体或三聚体以及anti-IgM的不同浓度的工作液,继续培养一定时间后MTT法检测光吸收值。结果表明:加入hsBLvS三聚体培养的B细胞的增殖活性高于或显著高于对照组,而加入hsBLvS单体的B细胞与对照组相比变化不明显。提示:比较hsBLyS单体和三聚体对B淋巴细胞增殖变化,确认hsBLyS主要是以三聚体形式发挥生物学活性。 3 hsBLyS对离体脾脏B淋巴细胞分化的作用 实验分两个系列。系列一:将分离的脾脏细胞悬液加入24孔细胞培养板,随机分为对照组、2.5μg/ml hsBLyS组、2.5μg/ml anti-IgM组和2.5μg/mlhsBLyS+2.5μg/ml anti-IgM组,每组3个平行孔,分别加入PBS、hsBLyS和/或anti-IgM工作液,培养72h。系列二:分组同系列一,只是在加入工作液培养24h之后,吸去各孔上清再加入LPS继续培养48h。培养结束后,各孔加入anti-CD45R/B220和anti-CD21单克隆荧光抗体标记,流式细胞仪分析hsBLyS对B淋巴细胞分化的影响。结果表明:加入hsBLyS诱导B淋巴细胞总体数量明显高于对照组;B220~+CD21~(lo)B淋巴细胞(T1 B淋巴细胞)数量虽略高于对照
文内图片:一IB细胞的成熟过程:在抗原非依赖阶段,骨髓中的B细胞开始表达gIM和gID;然后这些B细胞迁移至脾脏中继续发育,其中只有10%的B细胞得以从阳性删除中存活
图片说明: 细胞和不成熟B细胞的分化是抗原非依赖的,其分化过程在骨髓中进行。抗原依赖阶段是指成熟B细胞在抗原刺激后活化,并继续分化为合成和分泌抗体的浆细胞,这个阶段的分化主要是在外周免疫器官中进行的(图1一1)l’,2一5]。图1一IB细胞的成熟过程:在抗原非依赖阶段,骨髓中的B细胞开始表达gIM和gID;然后这些B细胞迁移至脾脏中继续发育,其中只有10%的B细胞得以从阳性删除中存活。B细胞在脾脏中发育成熟,,如果没有可溶性抗原和TH细胞的共同作用,这些B细胞将因为无法活化而只能生存很短时间。一旦得到活化,活化的B细胞将在二级淋巴器官中增殖,分化为浆细胞和记忆B细胞
文内图片:一B细胞活化的两种途径:(a)TDnatigne通过mgl的交联表达信号1;通过B细胞表面的CD4O和TH细胞表面的CD4OL相互接触产生信号2
图片说明: 、夕图1一ZB细胞过渡形态的分化。IM:不成熟B细胞(immaLtUeBeesll);Tl:immaLt珍ertansitionaltyPel:T2二InunaturertansitionalytPeZ;MZ:marginalzone;FO:ofllieular;Ae:activatedBeell;M:memoyrBeell:PC:PlasmaeellZB细胞的活化成熟B细胞的活化、增殖需要抗原的诱导。根据诱导抗原类型的不同,B细胞可呈现不同的活化方式(表1一l)[,o,川。表1一1Prope-tliesofT一cell刁ePendentandT一eell一indePendentantigcnsPorPerytTDantigensTlantigens介Pel竹PeZChemiealnatureSolublePorteinYesYesyesNosotyPeswitchingB朗terialCell一walleomPonenst(e.g.,LPS)N0PolymeriePoretninatigens;cPausarlpolyasceharidesLimited000NNNAffiniytmUatartionImmunologiememoyrPolyelonalaetivationN0N0Yesh(ihgdose).21TD一Ag诱导的活化自然情况下,多数抗原是TD一Ag(Teelldependentnati罗ne),所以B细胞活化多需TH细胞的辅助。B细胞吞噬能力较弱,但其表面gI是高亲和力的抗原受体
【学位授予单位】:南京师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R392

【参考文献】

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本文编号:2513643


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