当前位置:主页 > 医学论文 > 病理论文 >

中国汉族、维吾尔族人群MBL基因第54位密码突变的研究

发布时间:2020-10-18 11:14
   甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin,MBL)是C型凝集素超级家族胶凝素家族中一种重要的天然免疫防御分子,可识别结合各种病原体表面的糖分子,并通过激活补体凝集素途径而破坏病原体,或通过与吞噬细胞表面胶凝素受体结合介导直接调理作用。然而,MBL功能的发挥有赖于其一定的血清浓度,MBL缺乏或血清浓度过低是引起调理吞噬缺损的根本原因,可增加机体对各种病原微生物的易感性而导致机体反复感染,并且与自身免疫性疾病如系统性红斑狼疮(systemic lupuserythematosus,SLE)、类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的发生、发展有关。 现已证实,MBL血清浓度低下主要与其结构基因第一外显子的B、C和D等位基因变异体(分别编码54、57和52位氨基酸)有关,而正常的MBL等位基因为A。每一种变异体均由单碱基突变引起,致使MBL分子的胶原样区发生改变,导致突变个体血清MBL水平低下,有可能突变MBL分子的功能也受损。突变等位基因频率在不同种族人群差异很大,但总体上高的令人惊奇,可达0.29。亚洲人MBL血清浓度低下主要由54位密码突变引起。 我国是一个多民族人口大国,有必要对各民族人群MBL结构基因的突变情况进行调查,以便为我国MBL缺损的防治(研究)提供决策依据。鉴于此,我们对汉族、维吾尔族人群MBL基因第54位点突变的情况进行了研究。 目的: 1.建立敏感性高、特异性强、简单快捷、适合我国国情(条件较差)的MBL基因点突变和SNP的检测技术。 2.利用该技术对汉族、维吾尔族人群MBL结构基因第一外显子GGC54GAC突变进行检测,并估算其基因频率,比较汉族、维吾尔族该位点突变的差异。 材料与方法: 1.收集汉族、维吾尔族普通人群血标本,提取白细胞基因组DNA, 并建立扩增目的基因片段的基本PCR反应体系。 2.建立聚合酶链反应-单链构象多态性分析*ingle strand conforma- tlonpolymorphlsm analysis ofpol仰erase chain reaction production, PCR-SSCP)方法,初步调查汉族人群MBL基因GGC54GAC突变情况。 3.建立分子灯塔(molecular beacon,MB)技术,检测分析汉族。 维吾尔族人群MBL基因GGC54GAC突变基因。 结果: 1.用红细胞裂解液和 PCR缓冲液/非离于去污剂/蛋白酶K两种自配 试剂成功地提取了所收标本的人白细胞基因组DNA,并以此为模板成功 扩增出预期的 109hp MBL目的基因片段。 2.PCR-SSCP 方法初步筛查166 个汉族样本,共检出MBL GGC54GAC杂合突变19例,占11.45O,未检出突变纯合子。 3.成功建立了 MB杂交可视检测技术,并在 13 8份汉族样本中检出 MBL GGC54GAC突变纯合子 3例,占 2.17%,杂合子 29例,占 ZI刀1%; 120份维吾尔族标本中,检出突变纯合子1例,占0.83%,杂合子22例, 占 18.34%。 结论: 1.MB杂交技术特异性强,简单快捷,能进行可视性检测,完全适 用于点突变和 SNP的研究,技术特点明显优于PCR-SSCP。 2.汉族人群MBL结构基因第一外显子GGC54GAC 突变频率为 0月3,维吾尔族的突变频率为0.10,两民族GGC54GAC基因型分布和突 变频率无显著差异。
【学位单位】:第一军医大学
【学位级别】:硕士
【学位年份】:2002
【中图分类】:R392
【部分图文】:

PCR扩增产物,模板,PCR扩增


以上述条件进行PCR扩增,证实该批模板可用于人MBL目的基因片段的扩增,但PCR扩增产量间有一定的差别(见图2)。所有样品DNA经PCR扩增后,均可得到预期长度的目的基因片段,与克隆的标准模板所扩增产物的长度相当(见图3)。

电泳图,PCR扩增产物,模板,电泳图


MBL目的基因扩增产物电泳图
【参考文献】

相关期刊论文 前5条

1 陈政良;甘露聚糖结合蛋白[J];国外医学(免疫学分册);1997年01期

2 陈政良,朱锡华;天然免疫系统的“分子模式识别作用”及其免疫生物学意义[J];免疫学杂志;2000年03期

3 陈政良,朱锡华,谢佩蓉;中国人MBLc DNA的克隆与序列分析[J];免疫学杂志;1999年02期

4 王方勇,陈政良;甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶[J];生命的化学;2002年02期

5 陈政良,卢晓,张丽芸,韩强涛;GGC54GAC MBL突变体的构建[J];中国免疫学杂志;2001年05期



本文编号:2846223

论文下载
论文发表

本文链接:http://www.bigengculture.com/yixuelunwen/binglixuelunwen/2846223.html

分享