【论文|期刊】搜索 热门搜索: 论文 发表 社科期刊 北大核心 南大核心 cssci 科技期刊 教育

当前位置:主页 > 医学论文 > 内分泌论文 >

Rspo1通过Wnt信号通路促进成骨细胞分化

发布时间:2017-10-13 04:37  文章来源:笔耕文化传播

  本文关键词:Rspo1通过Wnt信号通路促进成骨细胞分化


  更多相关文章: 类风湿关节炎 Wnt/β-catenin信号通路 Rspo1 Wnt3A C2C12细胞


【摘要】:类风湿关节炎是一种以慢性侵蚀性关节炎为特征的全身性自身免疫病。其病理特点是关节滑膜的慢性炎症、血管翳形成。研究表明,Wnt信号通路同类风湿关节炎引起的骨代谢改变有着密切的联系,在类风湿关节炎患者病情发展中,Wnt信号途径受抑,进而抑制了成骨细胞增殖、分化,促进了骨质疏松、骨质侵蚀的发展。近几年,Rspo1(R-脊椎蛋白1)作为Wnt信号通路的激活剂被研究甚多,但不清楚它能否通过激活Wnt信号通路作用于成骨细胞。目前尚无有效的措施来改善和延缓类风湿关节炎骨侵蚀病情的进展,明确其骨侵蚀发生机制可为类风湿关节炎骨侵蚀的临床治疗提供科学依据。一、研究目的本实验通过构建含有TCF荧光素酶报告基因的C2C12细胞,检测其在Rspo1、Wnt-3a等刺激下,骨保护素、碱性磷酸酶及胞内β-catenin蛋白含量的变化,以研究Rspo1是否通过Wnt信号通路来促进成骨细胞分化,从而为防治类风湿关节炎骨侵蚀增添新理论和新手段。二、研究方法采用DMEM培养基对C2C12细胞进行原代培养和传代培养。将扩增了的C2C12细胞进行计数,以4×104/ml的浓度加入48孔培养基中继续培养备用。首先,采用Roche公司x CELLIgence技术的细胞动力学模型分析系统,研究RSpo1及Wnt3a对C2C12细胞增殖的影响。其次,应用Lipofectamine 2000将TCF报告质粒及p RL-SV40报告质粒共转染入C2C12细胞,继续培养。接着,我们通过检测骨成熟标志物碱性磷酸酶、骨保护素来验证Rspo1对C2C12细胞的作用。处理组细胞加入50ng/ml的Rspo1刺激因子,空白对照组为空,采用ELASA检测法,收集各组细胞上清液测骨保护素水平,裂解各组细胞测胞内碱性磷酸酶水平。随后增加了50ng/ml Wnt3a组和50ng/ml Rspo1+50ng/ml Wnt3a组,同样采用ELASA检测法,收集各组细胞上清液测骨保护素水平,裂解各组细胞测胞内碱性磷酸酶水平,并采用SPSS17.0统计软件对数据进行方差分析。β-catenin蛋白是Wnt信号通路中的关键蛋白,其进入核内后可与TCF质粒相结合,从而激活下游靶基因的转录。通过对TCF荧光素酶报告基因和β-catenin蛋白的检测可反应Wnt信号通路的激活状态。接着,C2C12细胞转染入TCF报告质粒及p RL-SV40报告质粒6h后,更换含不同浓度的Rspo1、Wnt3a及两者都有的新鲜完全培养基,24h后应用Promega公司的双荧光素酶报告基因检测系统检测报告基因转录活性。最后,我们对50ng/ml Rspo1组、50ng/ml Wnt3a组、50ng/ml Rspo1+50ng/ml Wnt3a组以及空白对照组细胞的β-catenin蛋白进行Western blot检测,并进行统计学分析。三、结果1.xCELLIgence系统检测显示RSpo1对C2C12细胞增殖没有影响,Wnt3a对C2C12细胞增殖有促进作用。2.在50ng/ml Rspo1组与空白对照组两组之间,使用碱性磷酸酶检测试剂盒检测碱性磷酸酶、Elisa试剂盒检测骨保护素,Rspo1组可上调碱性磷酸酶活性、促进骨保护素的分泌,进行方差分析,两组之间有显著性差异,P0.05,具有统计学意义。3.在50ng/ml Rspo1组、50ng/ml Wnt3a组、50ng/ml Rspo1+50ng/ml Wnt3a组以及空白对照组四组之间,同样检测碱性磷酸酶、骨保护素,两两之间进行分析。50ng/ml Rspo1组与空白对照组比较,结果同结果2一样;50ng/ml Wnt3a组与空白组比较,两组之间有显著性差异,P0.01;50ng/ml Wnt3a组与50ng/ml Rspo1+50ng/ml Wnt3a比较,两组之间有显著性差异,P0.01。4.检测被浓度递增的Rspo1、Wnt3a及两者共刺激处理下细胞的报告基因活性,根据绘制曲线图,可发现RSpo1对TCF报告质粒激活作用不明显;Wnt3a可激活TCF报告质粒,并且呈剂量依赖性;RSpo1和Wnt3a联合则有协同叠加作用。5.对50ng/ml Rspo1组、50ng/ml Wnt3a组、50ng/ml Rspo1+50ng/ml Wnt3a组以及空白对照组四组之间胞内的β-catenin进行Western Blot检测,根据蛋白电泳条带颜色从深到浅排列顺序为50ng/ml Rspo1+50ng/ml Wnt3a组、50ng/ml Wnt3a组、50ng/ml Rspo1组、空白对照组;50ng/ml Rspo1组与空白对照组比较,蛋白条带颜色稍深、柱状图稍高,但两组之间无显著性差异,P0.05;50ng/ml Wnt3a组与空白对照组比较,有显著性差异,P0.05;50ng/ml Rspo1+50ng/ml Wnt3a组与50ng/ml Wnt3a组比较,有显著性差异,P0.05。四、结论1.RSpo1并不能促进C2C12细胞的增殖;2.RSpo1可协同Wnt3A促进C2C12细胞向成骨细胞分化,表达碱性磷酸酶、骨保护素;3.单独RSpo1对Wnt信号通路激活作用不明显;4.RSpo1协同Wnt3A活化Wnt/β-catenin信号通路,通过协同激活该通路参与骨代谢,促进成骨细胞分化。
【关键词】:类风湿关节炎 Wnt/β-catenin信号通路 Rspo1 Wnt3A C2C12细胞
【学位授予单位】:第二军医大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:R593.22
【目录】:
  • 摘要5-8
  • Abstract8-11
  • 缩略词表11-12
  • 前言12-15
  • 课题设计15-17
  • 实验材料与方法17-30
  • 一、实验材料17-20
  • 二、实验方法20-30
  • 实验结果30-39
  • 讨论39-41
  • 结论41-42
  • 参考文献42-44
  • 综述 Rspo1通过经典Wnt/β-catenin信号通路在成骨细胞分化增殖中调节作用的研究进展44-52
  • 综述参考文献48-52
  • 发表论文和参加科研工作情况52-53
  • 致谢53

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 陈晓虎;孙瑜隆;骞爱荣;李京宝;商澎;;破骨细胞的形成和活化研究进展[J];中国细胞生物学学报;2014年02期

2 Roel NUSSE;Wnt signaling in disease and in development[J];Cell Research;2005年01期

我想下载此文(caj或pdf格式)

我想定制一篇类似选题的论文

我想获得渠道将论文发表出去

扩展阅读
1. Rspo1通过Wnt /β-catenin信号通路调节成骨细胞分化的..._道客巴巴
2. Rspo1通过 Wnt/β-catenin 信号通路调节成骨细胞分化的..._百度文库
3. R_spondin_一个新的Wnt信号通路相关蛋白家族的研究进展..._百度文库
4. Rspo1蛋白与Wnt信号通路及其在性别决定方面的研究进展_..._百度文库
5. Rspo1通过Wnt/β-catenin信号通路调节成骨细胞分化的研究进展--《...


本文连接:http://www.bigengculture.com/yixuelunwen/nfm/1022896.html


扫一扫加微信

扫一扫加QQ


精品期刊
  • 福建茶叶:北大核心,适合高职二本三本院校的难以发表核心而又要评副高级高级职称的老师,100%包发表,专业基本不限。
  • 现代电子技术计算机仿真:北大核心、CSCD,适合XX大学或2本以上院校的硕士讲师以上作者,100%包发表,限理工专业。
  • 商业经济研究:北大核心,适合各层次大学院校的经济管理大类专业的老师,通过率较高。
  • 职教论坛、教学与管理:北大核心,适合职业院校或大学的作者,要求职业教育或基础教育相关内容。
  • 中国药房、重庆医学:北大核心,适合地市级3甲医院的医生。
  • 经济研究导刊:2016年中国科技核心期刊目录(社会科学卷)收录期刊,包发,经济管理专业,作者不限。
论文发表相关期刊
  • 社科期刊:发表与社会科学专业相关的论文
  • 经管期刊:发表与经济管理专业相关的论文
  • 科技期刊:发表与科学技术工程科技专业相关的论文
  • 教育期刊:发表与教育教学专业相关的论文
  • 医学期刊:发表与医学医疗医药专业相关的论文
  • 文艺期刊:发表与文学艺术专业相关的论文
  • 法律期刊:发表与法律法制专业相关的论文
  • 省级期刊:省级管理机构主办或管理的期刊,评初级、中级可用
  • 国家级期刊:国家级管理机构主办或管理的期刊,评初级、中级可用
  • 北大核心期刊:北京大学中文核心期刊目录收录的期刊,评副高、高级可用
  • 南大核心CSSCI期刊:南京大学中文社会科学索引目录收录的期刊,评高级可用
  • 统计源科技核心期刊:为统计源科技核心目录所收录,分为社科类和自然科学类,评中级、副高可用
  • CSCD期刊:中国自然科学索引数据库所收录的期刊,评副高、高级可用
  • EI/SCI期刊:EI工程索引、SCI自然科学索引所收录的国际期刊,效力等同或高于北大核心\CSSCI期刊
其他增值服务
  • 专利申请:发明专利、实用新型专利、商标注册等,适用于公司或个人
  • 教材主编副主编挂名:教师出版教材挂名主编副主编评职称有效,正规出版社,个人出书镀金
论文发表咨询