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Smad7-siRNA对PC12细胞诱导的神经细胞缺血影响的研究

发布时间:2021-02-24 00:38
  缺血性脑卒中是危害人类健康的严重疾病,其防治方法和发病机制一直是国内外研究的热点。缺血性脑损伤可发生复杂的信号转导通路的变化同时产生一定的生物学作用,因此,阐明与缺血性脑损伤有关的信号转导通路的变化,寻找通路中的关键作用靶点和可应用于临床的神经保护物质,进而在神经细胞缺血损伤后促进神经细胞功能的恢复,对缺血性脑卒中的治疗具有重要意义。Smad7属于I-Smad家族,在TGF-β信号通路中发挥抑制作用。Smad7是TGF-β作用的靶基因之一,可反馈调节TGF-β/Smad信号通路,维持该通路的平衡,Smad7能够与R-Smad(Smad2、Smad3)竞争性地结合被激活的TGF-β受体,从而阻止Smad2、Smad3与TGF-β受体结合及其随后的磷酸化过程。目前研究表明,Smad7蛋白的高表达与胰腺癌、肝癌密切相关,还有研究表明转染Smad7基因可明显抑制肾间质纤维化的进程,另有研究表明,TGF-β超家族成员激活素A(ActA)/Smads通路的激活具有神经保护作用。Smad7作为一种信号蛋白在中枢神经系统存在其表达,Smad7在缺血性脑损伤中的变化规律和作用尚不明确,国内外未见报道。本... 

【文章来源】:吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】:80 页

【学位级别】:博士

【文章目录】:
中文摘要
Abstract
英文缩略词表
第1章 绪论
    1.1 SIRNA 技术研究进展
        1.1.1 siRNA 的设计
        1.1.2 siRNA 的合成
        1.1.3 siRNA 导入细胞内的方法
        1.1.4 siRNA 技术的应用
        1.1.5 问题与展望
    1.2 SMADS 蛋白的研究进展
        1.2.1 Smads 蛋白家族的结构与功能
        1.2.2 Smads 与细胞增殖
        1.2.3 Smads 与心血管疾病
        1.2.4 Smads 与凋亡
        1.2.5 Smads 与血管平滑肌细胞
        1.2.6 Smads 与神经系统
        1.2.7 展望
    1.3 参考文献
第2章 PC12 细胞诱导的神经细胞 OGD 模型的制备和鉴定
    2.1 材料和方法
        2.1.1 实验细胞
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要仪器
        2.1.4 实验方法
    2.2 结果
        2.2.1 形态学观察
        2.2.2 PC12 细胞转化为神经细胞的的鉴定
        2.2.3 神经细胞 OGD 模型的制备及鉴定结果
    2.3 讨论
    2.4 小结
    2.5 参考文献
第3章 靶向沉默 SMAD7 基因及沉默效果的检测
    3.1 材料和方法
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 实验仪器
        3.1.3 主要溶液的配制
        3.1.4 实验方法
        3.1.5 统计学处理
    3.2 结果
        3.2.1 转染效率检测结果
        3.2.2 MTT 法细胞存活率检测
        3.2.3 Real time-PCR 测定 Smad7 基因 mRNA 的表达
        3.2.4 Western blot 检测 Smad7 基因蛋白表达
    3.3 讨论
    3.4 小结
    3.5 参考文献
第4章 SMAD7-SIRNA 对 ACTA/SMADS 信号转导通路的影响
    4.1 实验材料
        4.1.1 主要试剂
        4.1.2 主要仪器
    4.2 实验方法
        4.2.1 细胞培养、细胞分化及 OGD 模型制备
        4.2.2 细胞转染
        4.2.3 Smad7、ActA、p300 mRNA 检测(Real time PCR)
        4.2.4 免疫印迹检测 Smad7、ActA、p300 蛋白表达
        4.2.5 统计学处理
    4.3 结果
        4.3.1 Real time-PCR 检测 Smad7、ActA、p300 mRNA 表达
        4.3.2 免疫印迹检测 Smad7、ActA、p300 蛋白表达
    4.4 讨论
    4.5 小结
    4.6 参考文献
第5章 SMAD7-SIRNA 对神经细胞缺血损伤细胞凋亡的影响
    5.1 实验材料
        5.1.1 主要试剂
        5.1.2 主要仪器
    5.2 实验方法
        5.2.1 细胞培养,细胞分化及 OGD 模型制备
        5.2.2 细胞转染
        5.2.3 凋亡小体的检测(DAPI 染色)
        5.2.4 细胞凋亡检测(流式细胞仪检测)
        5.2.5 Procaspase-3 蛋白检测(免疫印迹)
        5.2.6 统计学处理
    5.3 结果
        5.3.1 凋亡小体检测
        5.3.2 FCM 检测细胞凋亡
        5.3.3 免疫印迹检测 Procaspase-3 蛋白表达
    5.4 讨论
    5.5 小结
    5.6 参考文献
结论
攻读博士期间获得的成果
致谢



本文编号:3048497

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