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四环素调控的重组酵母细胞的构建及对猪尿中四环素类残留的筛检研究

发布时间:2021-02-24 00:09
  目的:构建四环素反应元件(Tetracycline Response Element,TRE)调控的重组基因酵母细胞,用于快速检测动物食品中四环素类抗生素的残留。方法:1.用PCR方法从酵母DNA提取液中扩增GPD(3-磷酸甘油醛脱氢酶,Glyceraldehyde-3-Phosphate Dehydro-genase)基因启动子,将其插入到酵母表达载体pYESTrp2,从而构建GPD 启动子驱动的酵母表达载体pGPD。2.人工合成双股V5抗原表位DNA,将其插入pGPD载体;以质粒pcDNA6/TR为模板,PCR扩增四环素阻逆蛋白(Tetracycline Repressor Protein,tetR)基因,并与pGPD载体的V5抗原表位DNA相融合,构建成GPD驱动的TR酵母表达载体,并转化于酵母细胞W303-1A,用Western blot方法鉴定tetR基因的表达。3.人工合成四环素反应元件(Tetracycline Response Element,TRE),将其插入pMP206酵母报告载体的CYC1启动子与报告基因Lac Z(β-半乳糖苷酶基因)之间,构建成TRE调控的La... 

【文章来源】:扬州大学江苏省

【文章页数】:83 页

【学位级别】:硕士

【文章目录】:
摘要
ABSTRACT
符号说明
第一章 前言
第二章 四环素阻逆蛋白(TR)在酵母细胞中的表达
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 结果
        2.1 pcDNA6/TR鉴定
        2.2 GPD驱动的酵母表达载体
        2.3 V5抗原表位与载体连接鉴定
        2.4 抗原表位DNA与TR基因相融合鉴定
        2.5 TR酵母表达载体的转化
        2.6 重组TR酵母细胞的PCR鉴定
        2.7 TR在酵母中的表达
第三章 四环素反应元件(TRE)调控的Lac Z报告载体的构建
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 TRE调控的Lac Z酵母报告载体
        1.3 TRE调控的Lac Z酵母报告载体转化
        1.4 实验研究
        1.5 资料的分析于处理
    2 结果
        2.1 pTeton-Lac Z酵母报告载体
        2.2 pyTeton-Lac Z酵母报告载体
        2.3 实验结果
第四章 四环素调控的重组酵母细胞的建立
    1 材料与方法
        1.1 GAL 1启动子的TA克隆
        1.2 GAL 1启动子驱动的TRE调控的Lac Z酵母报告载体的构建
        1.3 pGAL1-Teton-Lac Z转化于酵母细胞的鉴定
        1.4 酵母转化子实验筛选
        1.5 四环素调控的重组酵母细胞的实验研究
    2 结果
        2.1 GAL 1启动子的TA克隆
        2.2 GAL 1启动子驱动的TRE调控的Lac Z酵母报告载体
        2.3 酵母细胞转化子的PCR鉴定
        2.4 重组酵母的敏感性研究
        2.5 重组酵母的特异性研究
第五章 四环素调控的重组酵母对猪尿中四环素类抗生素残留的筛检研究
    1 材料与方法
        1.1 重组酵母对猪尿液中四环素类抗生素残留的检测
    2 结果
        2.1 ELISA法标准曲线
        2.2 ELISA法检出限
        2.3 对四环素类抗生素混合物的检测
        2.4 两种法检测对四环素类抗生素检测结果的比较
第六章 讨论
第七章 综述
    1. 食品中四环素类抗生素(TCs)残留的来源
    2. 残留的四环素类抗生素对人类健康的危害
    3. 现代检测食品中残留四环素类抗生素的技术
    4. 四环素残留的防治
    5. 研究前景的展望
参考文献
附录
致谢
攻读学位期间发表的学术论文情况



本文编号:3048463

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