热门搜索: 论文 发表 社科期刊 北大核心 南大核心 cssci 科技期刊 教育

当前位置:主页 > 医学论文 > 肿瘤论文 >

南蛇藤提取物通过maspin促进人胃癌MGC-803细胞凋亡的机制研究

发布时间:2019-01-11 07:52  文章来源:笔耕文化传播
【摘要】:胃癌是高度危害人类健康的恶性肿瘤,其致死率位居所有肿瘤致死率的第二位。我国是胃癌高发国家,每年约有17万人死于胃癌,占消化系统肿瘤死亡人数的50%以上,临床治疗常以手术加术后放化疗为主。由于早期临床症状不明显,致早期诊治率较低;又因胃癌肿瘤细胞侵袭转移能力强,使得复发转移率较高,预后较差。胃癌的发生发展与癌基因的激活和抑癌基因的失活密切相关。抑癌基因乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂(mammary serpin,maspin)在肿瘤细胞增殖、粘附、迁移和凋亡中起关键作用。因此,抑癌基因maspin很有可能成为治疗胃癌的潜在靶点。南蛇藤(Celastrus orbiculatus Thunb.)又名过山风、降龙草、黄藤等,始载于清代《植物名实图考》,其(藤)茎、根、叶、果实、种子均可入药。属于卫矛科南蛇藤属植物,在我国分布较为广泛,主要用于抗炎镇痛、活血消肿、祛风解毒等。课题组前期研究发现,南蛇藤茎提取物(Celastrus Orbiculatus Extracts,COE)具有抑制肿瘤细胞的迁移侵袭与增殖,促进肿瘤细胞凋亡等显著抗肿瘤的能力。本研究构建了消减抑癌基因maspin表达的人胃癌MGC-803细胞,初步探索了 COE通过maspin促进人胃癌细胞凋亡的作用及其分子机制。加入不同浓度的南蛇藤提取物后,与对照组相比,一定浓度范围内(20、40、80μg/mL)的COE可以增加maspin的表达,并呈浓度依赖性,促进了肿瘤细胞凋亡。其分子机制,可能与B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl2)家族、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(casepase)蛋白以及磷脂酰肌醇-3 激酶/蛋白激酶 B(phosphatidyl-inositol 3-kinase/protein kinase B,PI3K/Akt)信号通路和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)信号通路相关。本研究共分为三部分。第一部分人胃癌组织样本中maspiin的表达及人胃癌MGC-803/maspin-细胞株的构建目的:观察人胃癌组织样本中maspin的表达,构建消减maspin表达的人胃癌MGC-803细胞模型。方法:利用免疫组化方法检测人胃癌组织样本中maspin的表达水平。体外培养人胃癌细胞MGC-803至对数期,利用RNAi技术,将maspin siRNA基因整合入MGC-803细胞DNA,使胃癌细胞MGC-803中maspin沉默表达,同时设立野生型细胞组及阴性对照组。转染24 h后,收集人胃癌MGC-803细胞,提取总蛋白和总RNA,分别利用western blot法和qRT-PCR技术,检测细胞中MASPIN蛋白和RNA的表达情况。结果:MASPIN蛋白表达于胃间质及非肿瘤胃腺组织的胞浆及胞膜中,在胃癌细胞中表达量降低。转染24h后,Western blot结果显示,与野生型细胞及阴性对照组相比,转染maspin siRNA的人胃癌细胞MGC-803细胞中,MASPIN的蛋白表达量显著减少。qRT-PCR结果也显示,与野生型对照组及阴性对照组相比,转染maspin siRNA的人胃癌细胞MGC-803细胞中maspin的RNA表达水平显著减少。结论:胃癌组织样本中MASPIN表达量降低。成功构建人胃癌MGC-803/maspin-细胞。第二部分南蛇藤提取物对人胃癌MGC-803/maspin-细胞增殖和凋亡的影响目的:研究南蛇藤提取物(Celastrusorbiculatus extracts,COE)对人胃癌MGC-803/maspin-细胞凋亡及增殖的影响。方法:对数期人胃癌MGC-803/maspin-细胞,加入不同浓度的COE(10,20,40,80,160,320 μg/mL)。同时设立阴性对照组、不加药野生型对照组和阳性对照组(加入32μg/mL的5-Fu)。倒置显微镜观察MGC-803/maspin-细胞形态变化;透射电镜观察药物对细胞超微结构的影响。MTT法检测不同浓度COE对人胃癌MGC-803/maspin-细胞增殖的抑制作用;以TUNEL实验结合流式细胞术检测不同浓度COE对人胃癌MGC-803/maspin-细胞凋亡的改变;JC-1实验检测药物对MGC-803/maspin-线粒体膜电位的改变。Transwell侵袭实验检测不同浓度COE作用后,细胞侵袭能力的变化。Transwell迁移实验和细胞划痕实验,检测不同浓度COE对人胃癌MGC-803/maspin-迁移能力的影响。结果:抑癌基因maspin沉默表达后,人胃癌MGC-803细胞的凋亡减少,增殖和迁移侵袭能力增强。不同浓度的COE作用后,MASPIN的表达水平增加,呈明显的浓度依赖性(P0.05或P0.01),1IC50为101.711 g/mL。结论:抑癌基因maspin在体外对胃癌细胞具有抑制作用;COE增加maspin的表达量且增强其功能,有效促进了人胃癌细胞MGC-803的凋亡,抑制了人胃癌细胞MGC-803的增殖和侵袭迁移能力。第三部分南蛇藤提取物通过抑癌基因maspin促进人胃癌MGC-803细胞凋亡的分子机制目的:研究不同浓度南蛇藤提取物(COE)对人胃癌MGC-803/maspin-细胞的凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、casepase-3)表达水平的影响,初步探讨COE促进胃癌细胞凋亡的分子机制。方法:对数期人胃癌MGC-803/maspin-细胞,为了避免细胞毒性作用的干扰,设置COE低浓度组(20,40,80 μg/mL),同时设立阴性对照组、野生型细胞对照组和阳性对照组(5-Fu 32 μg/mL)。药物作用24 h后,提取细胞总蛋白,Western blot法检测PI3K/Akt/mTOR 和 MAPK 信号通路关键蛋白(包括 MASPIN、Bax、Bcl-2、casepase-3、PI3K、Akt、mTOR、Erkl/2、p38MAPK及相应的磷酸化蛋白)的表达水平。结果:COE 降低 Bcl-2 及 PI3K、Akt,p-Akt、p-mTOR、Erkl/2 蛋白的表达水平,呈浓度依赖性;COE对mTOR、p38MAPK蛋白的表达无明显影响;随着COE浓度的增加,Bax、casepase-3、p-Erkl/2、p-p38MAPK蛋白的表达量呈现上升趋势。结论:COE促进人胃癌MGC-803/maspin-细胞的凋亡,其机制可能与Bcl-2家族、casepase-3 蛋白及 PI3K/Akt/mTOR、MAPK 信号通路有关。
[Abstract]:......
【学位授予单位】:扬州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:R735.2

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 冯颖;朱骏;史建平;王红磊;张瑜;;DNA结合抑制因子-1、Maspin在乳腺浸润性导管癌中的表达及预后意义[J];兰州大学学报(医学版);2008年01期

2 刘兆春;赵霞;王英红;;Maspin与宫颈癌新辅助化疗疗效的相关性研究[J];现代肿瘤医学;2010年08期

3 张伟;王瑞月;李娟;张学义;;Maspin和MMP-2在乳腺浸润性导管癌中的表达及其临床意义[J];中国肿瘤外科杂志;2014年04期

4 冯颖;王芳;王红磊;史建平;张瑜;;Maspin、p53在乳腺浸润性导管癌中的表达及其意义[J];现代肿瘤医学;2008年09期

5 马新卉;马丽丽;满淑红;;子宫内膜腺癌组织中maspin、VEGF-C的表达变化及意义[J];山东医药;2009年50期

6 贺美兰,姜安丽,张鹏举,陈蔚文,刘志芳,张建业;maspin基因启动区的初步鉴定[J];山东大学学报(医学版);2005年01期

7 刘胜霞;白玉贤;;Maspin在胃癌中的作用[J];实用肿瘤学杂志;2007年02期

8 乔玉环;陈志华;郭瑞霞;文政芳;侯艺芳;;子宫内膜癌组织中Maspin蛋白的表达[J];郑州大学学报(医学版);2008年03期

9 王逸君;王志明;李新营;袁伟杰;;Maspin在甲状腺癌中的表达及其临床意义[J];中国普通外科杂志;2009年05期

10 邹纪东;徐伟;吕正华;曹洪源;王海波;栾信庸;;下咽癌中maspin表达与血管和淋巴管生成的相关性[J];山东大学学报(医学版);2010年12期

相关会议论文 前4条

1 吴齐斌;郑秀;吴荔香;宋一一;孙蓬明;;Maspin和P53在妊娠滋养细胞疾病中的表达及临床意义[A];中华医学会第十次全国妇产科学术会议妇科肿瘤会场(妇科肿瘤学组、妇科病理学组)论文汇编[C];2012年

2 吴齐斌;宋一一;郑秀;孙蓬明;;Maspin在葡萄胎恶变中的临床意义[A];中华医学会第十次全国妇产科学术会议妇科肿瘤会场(妇科肿瘤学组、妇科病理学组)论文汇编[C];2012年

3 周艳芳;;Clusterin和Maspin在子宫内膜癌中的表达相关性研究[A];中华医学会第十次全国妇产科学术会议妇科肿瘤会场(妇科肿瘤学组、妇科病理学组)论文汇编[C];2012年

4 白玉贤;韩宇;苑珩珩;;胃癌组织中Maspin核表达与胃癌术后患者行5-FU为基础化疗方案的生存时间的关系[A];2009医学前沿论坛暨第十一届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2009年

相关硕士学位论文 前8条

1 王逸君;Maspin在甲状腺癌中的表达及其临床意义[D];中南大学;2007年

2 田腊梅;Maspin基因在妊娠滋养细胞疾病中的表达及发病中的作用机制[D];河北医科大学;2009年

3 武永明;甲基化与非甲基化的Maspin基因在非侵入性产前诊断中的应用研究[D];山西医科大学;2009年

4 曹玲;南蛇藤提取物靶向抑癌基因maspin抑制胃癌转移的初步研究[D];扬州大学;2015年

5 井明晰;胃癌中maspin和突变型p53蛋白的表达及临床病理学意义[D];中国医科大学;2004年

6 崔小健;Maspin和C-erbB-2基因在前列腺癌中表达及两者相关性的初步研究[D];天津医科大学;2006年

7 张蓉;Maspin与VEGF-C在喉癌中的表达及其相关性研究[D];河北医科大学;2013年

8 高阳;Maspin和Caspase-3在宫颈癌中的表达和相关性[D];天津医科大学;2007年



本文编号:2406869


论文下载
论文发表
教材专著
专利申请


    下载步骤:1.微信扫码 2.备注编号 2406869. 3.下载文档
    注:1.必须备注编号,否则无法下载;2.扫码后10分钟即可下载,如有问题,点击微信联系客服。


    本文链接:http://www.bigengculture.com/yixuelunwen/zlx/2406869.html